AKAP 9 Plasmídeo duplo de Nickase (h2): sc-405430-NIC-2
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- AKAP 9O plasmídeo de dupla Nickase (h2) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase AKAP 9 (h2) e o Plasmídeo Double Nickase AKAP 9 (h22) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para AKAP9. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:AKAP 9 Anticorpo (7E12): sc-517030
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
AKAP 9 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-405430-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
A AKAP9 humana (proteína de ancoragem da A-quinase 9) é uma grande proteína de andaime que organiza espacialmente a PKA e outras enzimas de sinalização no aparelho de Golgi, no centrossomo e nos centros organizadores de microtúbulos, de modo a coordenar a sinalização dependente de AMPc com a dinâmica do citoesqueleto. Ela contribui para a nucleação de microtúbulos e a montagem do fuso mitótico, sustenta a integridade do Golgi e ajuda a regular a progressão do ciclo celular e a polaridade celular por meio de atividades compartimentalizadas de quinases e fosfatases. A desregulação e alterações estruturais de AKAP9 têm sido associadas à instabilidade genômica e a rearranjos oncogênicos, e a proteína também é estudada em contextos de excitabilidade cardíaca e de fenótipos do neurodesenvolvimento, nos quais microdomínios de sinalização são perturbados. A edição gênica de AKAP9 permite investigar mecanisticamente andaimes de sinalização subcelular, a biologia do centrossomo e do Golgi e relações genótipo–fenótipo em modelos de tecidos proliferativos e excitáveis.
AKAP 9 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h2) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus AKAP9 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de AKAP9. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função AKAP9. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com AKAP9 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.