AKAP 7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406308

概要

AKAP7（A-kinase anchoring protein 7）はPKAの足場タンパク質であり、プロテインキナーゼAを特定の細胞内マイクロドメインに係留することで、cAMP依存性シグナル伝達を空間的に制限します。PKAと関連エフェクターをコンパートメント化することにより、AKAP7はイオンチャネル活性、膜興奮性、ならびにcAMPに応答する下流の転写プログラムを制御するリン酸化イベントの協調に寄与します。このようなアンカー型シグナル伝達は、興奮性組織および非興奮性組織におけるカルシウム制御や刺激連関応答など、細胞ダイナミクスの精緻な制御に貢献します。AKAP7依存性シグナル伝達の変化を含むcAMP/PKA足場ネットワークの破綻は、心臓電気生理、神経シグナル伝達、さらにキナーゼの区画化異常に関連する幅広い病態の機序研究において重要です。

AKAP 7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAKAP7遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AKAP7内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AKAP7のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AKAP 7タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AKAP 7シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AKAP7欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AKAP 7の機能に不可欠なAKAP7エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AKAP7ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AKAP 7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAKAP 7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AKAP7遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AKAP 7 HDRプラスミド（h）および AKAP 7 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAKAP7ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAKAP7標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。