AIP4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421158

Panoramica

Itch (AIP4) codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo HECT che catalizza l’ubiquitinazione delle proteine bersaglio per controllarne la stabilità e il traffico intracellulare, plasmando la proteostasi e la durata dei segnali. Nelle cellule murine, AIP4 partecipa alla regolazione ubiquitina-dipendente delle vie di segnalazione immunitaria, inclusa la modulazione di NF-κB e dei complessi prossimali al recettore correlati, influenzando così la produzione di citochine e l’omeostasi infiammatoria. Itch contribuisce inoltre alla differenziazione dei linfociti T e alla tolleranza periferica attraverso il turnover di regolatori trascrizionali e adattatori di segnalazione. Un’attività deregolata di Itch è stata associata a squilibri immunitari, fenotipi infiammatori e a un controllo alterato delle vie di crescita e sopravvivenza cellulare rilevanti per la biologia del cancro e le interazioni neuro-immuni.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AIP4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Itch in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Itch insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Itch a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AIP4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Itch per lo studio della segnalazione di AIP4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Itch critici per la funzione di AIP4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Itch per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AIP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal AIP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Itch. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AIP4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR AIP4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Itch per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Itch definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.