AIF Double Nickaseプラスミド (h): sc-400370-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- AIF Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- AIFダブルニカースプラスミド（h）およびAIFダブルニカースプラスミド（h2）は、AIFM1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: AIF 抗体 (E-1): sc-13116
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
AIF Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400370-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AIF Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400370-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトAIFM1は、ミトコンドリア膜間腔に局在するフラボタンパク質型オキシドレダクターゼであるアポトーシス誘導因子（apoptosis-inducing factor, mitochondrion-associated 1：AIF）をコードしており、呼吸鎖機能および細胞内のレドックス恒常性の維持を担う。強い細胞ストレス下では、AIFは核へ移行し、大規模なDNA断片化とクロマチン凝縮を介してカスパーゼ非依存性の細胞死を促進し得る。したがってAIFM1は、ミトコンドリアの品質管理、酸化ストレス応答、ならびにエネルギー産生不全や神経変性表現型と交差するプログラム細胞死経路の中核をなす。AIFM1の遺伝学的・機能的な制御異常は、ミトコンドリア脳筋症、末梢神経障害、さらに酸化的リン酸化の障害とアポトーシスシグナルの変容が疾患病態に寄与するより広い文脈に関連づけられている。
AIF ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AIFM1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AIFM1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AIFM1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AIFM1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。