AID CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401542-ACT

ヒトAICDAは、活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）をコードする。AIDはDNA/RNA編集酵素であり、転写中の一本鎖DNA上でシチジンからウリジンへの脱アミノ化反応を触媒する。AIDは胚中心B細胞における体細胞超変異およびクラススイッチ組換えによる抗体多様化に必須で、その活性は塩基除去修復やミスマッチ修復を含むDNA修復過程と関連している。標的外変異導入を抑えるためAIDの厳密な制御が必要であり、制御不全または異所性発現はゲノム不安定性を高め、染色体転座や変異蓄積に寄与しうる。そのためAICDAは、獲得免疫、B細胞分化、ならびに変異駆動性のがん化（腫瘍化）機構を制御する経路において広く研究されている。

AID CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AICDAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AID CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AICDA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAICDA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AIDの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAICDA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAID依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAICDA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAID経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。