AHNAK CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402364-ACT

AHNAKは、細胞膜および細胞骨格コンパートメントに局在する巨大な足場（スキャフォールド）タンパク質をコードしており、細胞構造やシグナル伝達に関与する多タンパク質複合体の編成を助けます。AHNAKは、アネキシン、S100タンパク質、さらに接着結合や収縮ネットワークの構成因子との相互作用を介して、アクチン動態の制御、膜修復、カルシウム依存性プロセスの調節に関与することが示されています。細胞骨格リモデリングと細胞—細胞／細胞—細胞外マトリックス間コミュニケーションを統合することで、AHNAKは移動、接着、ストレス応答に影響を与えます。AHNAK発現の異常は、がん生物学や組織リモデリングを含む複数の疾患コンテキストで報告されており、膜の足場形成を転写・表現型プログラムに結びつける経路を研究するうえで有用な結節点（ノード）となります。

AHNAK CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AHNAKの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AHNAK CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AHNAK 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAHNAK転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AHNAKの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAHNAK遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAHNAK依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAHNAK発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAHNAK経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。