AdSS1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419030

概要

マウスAdssl1はAdSS1（アデニロコハク酸合成酵素ファミリー酵素）をコードしており、AMP産生の重要な段階であるアデニロコハク酸の生成を触媒することで、de novoプリン生合成を支えます。ヌクレオチド恒常性への寄与を通じて、AdSS1はDNA/RNA合成、エネルギーチャージ、および増殖能の維持に関与し、ミトコンドリア機能と細胞増殖を結び付ける中核的な代謝プログラムと関連します。プリン代謝の攪乱は複製やストレス応答経路を乱し得るほか、代謝機能不全や細胞周期制御の変化と関連することがしばしばあります。この経路における筋肉で高発現するパラログとして、Adssl1は、ヌクレオチドフラックスの組織特異的な制御と、それが生体エネルギーや細胞生理に及ぼす下流影響を研究する上で重要です。

AdSS1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAdssl1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Adssl1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Adssl1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AdSS1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AdSS1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Adssl1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AdSS1の機能に不可欠なAdssl1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Adssl1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AdSS1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAdSS1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Adssl1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AdSS1 HDRプラスミド（m）および AdSS1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAdssl1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAdssl1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。