ADRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400802

概要

PLIN2は、脂肪分化関連タンパク質（ADRP）をコードしており、これは中性脂質の貯蔵や、脂質滴の新生（バイオジェネシス）、拡大、分解・回転（ターンオーバー）といった脂質滴動態を制御する脂質滴被覆タンパク質です。ADRPは、脂質滴と細胞膜との相互作用を調整し、肝細胞・脂肪細胞・マクロファージにおける脂肪酸の取り扱い、脂質毒性ストレス応答、オルガネラ間クロストークなどを含む代謝過程に影響を与えます。細胞内の脂質輸送および貯蔵における役割から、PLIN2は脂肪肝（肝脂肪化）、肥満に伴う代謝機能障害、ならびに動脈硬化形成過程における泡沫細胞形成の文脈で広く研究されています。また、脂質滴に富む表現型を示すがんにおいても、脂質貯蔵プログラムが増殖や酸化ストレス適応を支え得ることから、PLIN2発現の変化が検討されています。

ADRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPLIN2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PLIN2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PLIN2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ADRPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ADRPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PLIN2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ADRPの機能に不可欠なPLIN2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PLIN2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ADRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびADRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PLIN2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ADRP HDRプラスミド（h）および ADRP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPLIN2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPLIN2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。