Adducin α CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401693

概要

ADD1はアデューシンα（adducin α）をコードしており、アクチンフィラメントをキャップし、細胞皮質におけるスペクトリン‐アクチン網の組み立てを促進する膜骨格タンパク質です。細胞骨格リモデリングの制御を介して、アデューシンαは細胞形態、接着、膜安定性に影響を与え、その下流で細胞移動やメカノトランスダクションなどの過程にも作用します。アデューシンの機能はリン酸化依存的なシグナル伝達によって調節され、PKCおよびPKAに関連する経路などがアクチン結合ダイナミクスや皮質構造を変化させます。ADD1を含む細胞骨格および膜足場タンパク質の制御異常は、上皮バリア特性の変化や、循環器・神経生物学研究に関連する細胞表現型と関連づけられています。

Adducin α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるADD1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ADD1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ADD1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Adducin αタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Adducin αシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ADD1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Adducin αの機能に不可欠なADD1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ADD1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Adducin α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAdducin α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ADD1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Adducin α HDRプラスミド（h）および Adducin α HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはADD1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のADD1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。