Adducin α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401693-ACT

O ADD1 humano codifica a aducina alfa, uma proteína do citoesqueleto associada à membrana que “capa” e agrupa filamentos de actina e promove a montagem da rede espectrina–actina na membrana plasmática. Ao regular o remodelamento do citoesqueleto, a estabilidade das junções célula–célula e a organização da membrana, o ADD1 contribui para a integridade dos eritrócitos e para o controlo mais amplo da forma e motilidade celulares. A fosforilação da aducina por cinases como a PKC e por vias de sinalização associadas à Rho modula a sua afinidade pela actina e pela espectrina, ligando-a ao controlo dinâmico da arquitetura cortical. Perturbações genéticas e funcionais de ADD1 têm sido associadas a alterações na estabilidade da membrana e em fenótipos de sinalização relevantes para estudos de biologia vascular, loci de risco para hipertensão e mecanismos ligados ao citoesqueleto em doenças complexas.

Adducin α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Adducin α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Adducin α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Adducin α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Adducin α em células tumorais com expressão de ADD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.