ADAM12 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-418983

概要

ADAM12（a disintegrin and metalloproteinase 12）は、膜に固定されたプロテアーゼであり接着制御因子でもあり、細胞外マトリックス（ECM）のリモデリング、増殖因子シグナル伝達、細胞間相互作用を調節します。マウス組織においてADAM12は、細胞表面タンパク質のプロテアーゼによるシェディングに寄与し、EGFRやTGF-β関連過程を含む、筋形成、線維化、ストローマのリモデリングに関与する経路に影響を与えます。その活性は、ECM組成や受容体の利用可能性を変化させることで、細胞移動、分化、メカノトランスダクションに影響します。ADAM12の発現または活性の異常は、病的な組織リモデリングや炎症関連の表現型と関連づけられており、筋骨格系および線維化に関する文脈での疾患機序研究において重要です。

ADAM12 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAdam12遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Adam12内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Adam12のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ADAM12タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ADAM12シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Adam12欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ADAM12の機能に不可欠なAdam12エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Adam12ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ADAM12 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびADAM12 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Adam12遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ADAM12 HDRプラスミド（m）および ADAM12 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAdam12ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAdam12標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。