ADAM10 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400883-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ADAM10 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ADAM10ダブルニカースプラスミド（h）およびADAM10ダブルニカースプラスミド（h2）は、ADAM10を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: ADAM10 抗体 (B-3): sc-28358
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ADAM10 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400883-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADAM10 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400883-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADAM10は、ADAMファミリーに属する亜鉛依存性の膜貫通型メタロプロテアーゼをコードしており、多様な細胞表面タンパク質のエクトドメイン・シェディングを介して、受容体の利用可能性や細胞間コミュニケーションを再構築します。ADAM10は制御性膜内プロテオリシス（regulated intramembrane proteolysis）にも関与し、Notchシグナル伝達、APP（アミロイド前駆体タンパク質）のプロセシング、ならびにカドヘリン、各種リガンド、サイトカイン受容体などの接着分子・免疫調節分子の切断に影響を与えます。これらの作用を通じて、神経発生、シナプス機能、上皮バリアの生物学、免疫応答に影響し、膜近傍のシグナル伝達ネットワークにまたがる刺激（キュー）を統合します。ADAM10の活性や発現の破綻（ディスレギュレーション）は、がんに関連するシグナル伝達や浸潤表現型、APP代謝に結びつく神経変性メカニズム、炎症性の病態生理に関与することが示唆されており、経路研究における機序解明の標的として有用です。
ADAM10 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADAM10 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADAM10内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADAM10の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADAM10が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。