Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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ACTR-IIA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418976
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ACTR-IIA Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico ACTR-IIA, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ACTR-IIA Antibody (D-9): sc-515826
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ACTR-IIA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-418976 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Acvr2a codifica il recettore dell’activina A di tipo IIA (ACTR-IIA), un recettore transmembrana a chinasi serina/treonina che lega le activine e ligandi correlati della superfamiglia del TGF-β per regolare la trascrizione dipendente da SMAD2/3. Nelle cellule di topo, la segnalazione mediata da ACTR-IIA influenza la strutturazione embrionale, la regolazione dell’asse riproduttivo e l’omeostasi tissutale coordinando programmi di differenziamento, proliferazione e matrice extracellulare. Questa via interagisce con altri recettori e modulatori della famiglia del TGF-β per modulare risposte specifiche del contesto durante lo sviluppo e il rimodellamento. Una segnalazione activina/ACTR-IIA deregolata è stata implicata nel rimodellamento fibrotico, in alterazioni tissutali associate all’infiammazione e in un controllo della crescita alterato, rendendola rilevante per studi meccanicistici di fenotipi associati a malattie.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTR-IIA (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Acvr2a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Acvr2a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Acvr2a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACTR-IIA.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Acvr2a per lo studio della segnalazione di ACTR-IIA, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Acvr2a critici per la funzione di ACTR-IIA
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Acvr2a per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal ACTR-IIA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ACTR-IIA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Acvr2a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal ACTR-IIA Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ACTR-IIA (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Acvr2a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Acvr2a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.