ACSVL5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401578-ACT

O SLC27A1 humano codifica a ACSVL5 (FATP1), uma sintetase de acil-CoA de cadeia longa que catalisa a ativação dependente de ATP de ácidos graxos de cadeia longa em acil-CoA, acoplando a captação de lipídios ao uso metabólico intracelular. Ao direcionar ácidos graxos para a β-oxidação, para a biossíntese de triglicerídeos e fosfolipídios e para a dinâmica de gotículas lipídicas, a ACSVL5 ajuda a moldar o balanço energético celular e a remodelação de membranas. A atividade de SLC27A1 interage com programas lipídicos regulados por PPAR e influencia o fluxo lipídico mitocondrial e do retículo endoplasmático (RE), conectando a disponibilidade de nutrientes à sinalização metabólica. A desregulação do manejo de ácidos graxos envolvendo SLC27A1 tem sido associada a fenótipos metabólicos e a vias de estresse celular induzidas por lipídios, tornando-o relevante para estudos de sensibilidade à insulina, inflamação e reprogramação metabólica em modelos de doença.

ACSVL5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC27A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACSVL5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC27A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC27A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACSVL5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC27A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACSVL5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACSVL5 em células tumorais com expressão de SLC27A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.