ACSL4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401649-ACT

A ACSL4 humana (acil‑CoA sintetase da família de cadeia longa, membro 4) catalisa a ativação dependente de ATP de ácidos graxos poli-insaturados de cadeia longa, gerando tioésteres acil‑CoA que direcionam lipídios para a remodelação de membranas e a biossíntese de lipídios complexos. Ao moldar a composição de fosfolipídios, a ACSL4 influencia o metabolismo do ácido araquidônico, a sinalização por eicosanoides e a dinâmica da peroxidação lipídica, que se cruzam com a homeostase redox e vias reguladas de morte celular. Alterações na atividade da ACSL4 têm sido associadas à desregulação do metabolismo lipídico na biologia do câncer, em processos neurodegenerativos e em estados inflamatórios, tornando-a um ponto relevante para estudar a sensibilidade à ferroptose e a reprogramação metabólica. Sua expressão e seu produto enzimático fornecem elos mecanísticos entre o fluxo lipídico, a função mitocondrial e a sinalização de resposta ao estresse.

ACSL4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACSL4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACSL4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACSL4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACSL4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACSL4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACSL4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACSL4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACSL4 em células tumorais com expressão de ACSL4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.