ACSL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420278-ACT

O gene Acsl1 de camundongo codifica a acil-CoA sintetase 1 de cadeia longa (ACSL1), uma enzima que ativa ácidos graxos de cadeia longa ao convertê-los em tioésteres acil-CoA, comprometendo assim substratos lipídicos com a β-oxidação, a remodelação de fosfolipídios e a síntese de triglicerídeos. A ACSL1 ajuda a coordenar a homeostase energética celular e o processamento de lipídios em vias associadas às mitocôndrias e ao retículo endoplasmático (RE), influenciando processos como a dinâmica das gotículas lipídicas e a composição de membranas. Alterações na atividade e nos padrões de expressão da ACSL1 são frequentemente estudadas no contexto de inflamação metabólica, resistência à insulina, esteatose hepática e remodelação lipídica relevante para doenças cardiovasculares, em que mudanças nos pools de acil-CoA podem reprogramar a sinalização e a função mitocondrial. Como resultado, o Acsl1 é um ponto útil para dissecar o metabolismo de ácidos graxos, a detecção de nutrientes e respostas ao estresse induzidas por lipídios em modelos murinos e sistemas celulares.

ACSL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Acsl1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACSL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Acsl1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Acsl1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACSL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Acsl1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACSL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACSL1 em células tumorais com expressão de Acsl1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.