ACP1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404488-NIC

ヒトACP1は、低分子量プロテインチロシンホスファターゼ（LMW-PTP）をコードしており、主要なシグナル伝達タンパク質上のホスホチロシン残基を脱リン酸化することで、受容体を起点とする経路の強さや持続時間を調整します。リン酸化依存的な事象を制御することにより、ACP1は増殖因子受容体シグナル伝達、細胞骨格ダイナミクス、さらに増殖・接着・代謝応答を司る下流のMAPKおよびPI3K/AKTネットワークの挙動に影響を与えます。遺伝学的・機能的研究により、ACP1の活性や変異が免疫細胞のシグナル伝達や代謝表現型の変化と関連することが示されており、炎症、インスリンシグナル、がん化に伴う経路再配線の研究における重要性が支持されています。キナーゼ活性に拮抗するホスファターゼの要所（ノード）として、ACP1はシグナル伝達の忠実性やリン酸化恒常性を検討する研究で頻繁に解析対象となります。

ACP1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ACP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ACP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ACP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ACP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。