ACOX1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m2): sc-418948-ACT-2

O Acox1 de camundongo codifica a acil-CoA oxidase 1 (ACOX1), uma flavoproteína peroxissomal que catalisa a primeira etapa — e limitante da velocidade — da β-oxidação de acil-CoA de ácidos graxos de cadeia linear, gerando trans-2-enoil-CoA e contribuindo para o catabolismo lipídico dependente de peroxissomos. A atividade da ACOX1 sustenta a homeostase celular de lipídios e energia e se relaciona com a biogênese de peroxissomos, com a regulação do estresse oxidativo por meio da produção de H2O2 e com redes de sinalização metabólica, como programas transcricionais dirigidos por PPAR. A desregulação de Acox1 está associada a alterações no processamento de ácidos graxos de cadeia muito longa, acúmulo de lipídios no fígado, inflamação e fenótipos mais amplos do metabolismo peroxissomal, tornando-o relevante para estudos sobre mecanismos da doença hepática gordurosa e remodelamento metabólico. A edição gênica ou perturbações genéticas de Acox1 em camundongos são úteis para dissecar vias de β-oxidação peroxissomal, assinaturas lipidômicas e consequências específicas de órgão ou tipo celular da disfunção peroxissomal em modelos de pesquisa biomédica.

ACOX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Acox1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACOX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Acox1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Acox1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACOX1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Acox1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACOX1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACOX1 em células tumorais com expressão de Acox1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.