Plásmido CRISPR de Activación (m) ACOT11: sc-435977-ACT

Acot11 codifica la acil-CoA tioesterasa 11 (ACOT11), una enzima mitocondrial del metabolismo lipídico que hidroliza acil-CoA de ácidos grasos de cadena larga para generar ácidos grasos libres y CoA, modulando así el tamaño del pool de acil-CoA y el flujo posterior de la β-oxidación. Al regular la disponibilidad de sustratos mitocondriales y los intermediarios de señalización lipídica, ACOT11 influye en el balance energético, el metabolismo oxidativo y el manejo de lípidos en el tejido adiposo. En modelos de ratón, las alteraciones en la actividad de ACOT11 se han asociado con fenotipos metabólicos relacionados con la termogénesis y la utilización de nutrientes, lo que la hace relevante para estudiar la función mitocondrial, la homeostasis de ácidos grasos y las respuestas al estrés metabólico.

ACOT11 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Acot11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ACOT11 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Acot11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Acot11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ACOT11. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Acot11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ACOT11 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ACOT11 en células tumorales con expresión de Acot11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.