AChE CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401091

概要

ヒトのACHEはアセチルコリンエステラーゼ（AChE）をコードしており、AChEはセリン加水分解酵素として、シナプスおよび神経筋接合部でアセチルコリンを迅速に加水分解することでコリン作動性神経伝達を終結させます。AChEの活性は、従来のシナプス伝達にとどまらず、アセチルコリンの利用可能量を調節することを通じて、興奮—収縮連関、自律神経調節、ならびにコリン作動性抗炎症シグナル伝達にも影響を及ぼします。ACHEの発現や酵素機能の破綻は、神経ネットワーク機能の変化、ストレスおよび神経炎症に関連する経路、さらに神経筋・神経変性に関わる表現型への感受性と関連づけられてきました。膜結合型および可溶型の酵素として組織特異的アイソフォームを有するACHEは、シナプス生理、毒性物質応答、コリン作動性シグナルのクロストークのモデルにおいて頻繁に研究されています。

AChE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるACHE遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ACHE内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ACHEのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AChEタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AChEシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ACHE欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AChEの機能に不可欠なACHEエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ACHEゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AChE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAChE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ACHE遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AChE HDRプラスミド（h）および AChE HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはACHEホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のACHE標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。