ACAT-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402300-LAC

ACAT1 codifica l’acetil-CoA acetiltransferasi 1 (ACAT-1), una tiolasi mitocondriale che catalizza la condensazione reversibile di due molecole di acetil-CoA in acetoacetil-CoA e supporta l’utilizzo dei corpi chetonici e il catabolismo degli amminoacidi a catena ramificata. Attraverso il suo ruolo nel flusso mitocondriale di acetil-CoA, ACAT-1 contribuisce a coordinare il metabolismo ossidativo, l’equilibrio redox e la scelta dei substrati in condizioni di stress nutrizionale. La disregolazione delle vie legate ad ACAT1 è stata associata a errori congeniti del metabolismo dei chetoni e degli amminoacidi, nonché ad alterazioni degli stati metabolici mitocondriali rilevanti per fenotipi di tipo neurosviluppo e neurometabolico. La funzione di ACAT-1 è inoltre frequentemente studiata nelle ricerche sul rimodellamento metabolico in cellule tumorali e immunitarie, in cui l’instradamento del carbonio nei mitocondri influenza programmi di proliferazione e differenziamento.

Le particelle di attivazione lentivirale ACAT-1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ACAT1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ACAT-1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ACAT1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ACAT-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ACAT1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.