ACAT-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402300-NIC

ACAT1 codifica l'acetil-CoA acetiltransferasi 1 mitocondriale (ACAT-1), una tiolasi che catalizza la scissione tiolitica reversibile dell'acetoacetil-CoA in acetil-CoA, collegando l'utilizzo dei corpi chetonici alla disponibilità cellulare di acetil-CoA. Questo enzima partecipa al catabolismo mitocondriale degli acidi grassi e degli amminoacidi a catena ramificata e influisce sull'omeostasi energetica integrandosi con il ciclo del TCA (acido tricarbossilico) e con la regolazione metabolica dipendente dall'acetilazione. Alterazioni dell'attività di ACAT1 sono state associate a errori congeniti del metabolismo dei corpi chetonici e a fenotipi più ampi di disfunzione mitocondriale, rendendolo rilevante per studi su stress metabolico, bilancio redox e segnalazione dipendente dai nutrienti. ACAT-1 è inoltre studiata nel contesto del rimodellamento metabolico delle cellule tumorali e dei difetti bioenergetici associati alla neurodegenerazione, in cui il flusso di acetil-CoA e la funzione mitocondriale risultano alterati.

ACAT-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACAT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACAT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACAT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACAT1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.