ABR CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430977

概要

Abrは、RhoファミリーのGTPase活性化タンパク質（RhoGAP）であるABRをコードしており、RacやCdc42などの低分子GTPaseによるシグナル伝達を抑制することで、細胞骨格の再構築、細胞接着、遊走を調節します。マウス細胞では、ABRはアクチンダイナミクスの制御や、免疫細胞の移動（トラフィッキング）および炎症応答に関連する下流経路の調節に寄与します。GTPase駆動性のシグナル伝達カスケードを負に制御することにより、ABRはエンドサイトーシス、細胞極性、ストレス応答性シグナルなどの過程にも影響します。Rho GTPaseシグナルの破綻は、異常な運動性や組織構築の乱れを伴う表現型と広く関連するため、Abrはシグナルネットワークのバランス機構を解析するうえで有用な結節点となります。

ABR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAbr遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Abr内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Abrのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ABRタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ABRシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Abr欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ABRの機能に不可欠なAbrエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Abrゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ABR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびABR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Abr遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ABR HDRプラスミド（m）および ABR HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAbrホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAbr標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。