ABCD4 Plasmide Double Nickase (h): sc-406750-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ABCD4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ABCD4 Double Nickase Plasmid (h) e il ABCD4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ABCD4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ABCD4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406750-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ABCD4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406750-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABCD4 codifica una proteina correlata ai trasportatori della famiglia ATP-binding cassette (ABC) che svolge una funzione nella processamento lisosomiale della cobalamina (vitamina B12), consentendone l’esportazione dal lisosoma al citosol per la conversione nei cofattori attivi adenosilcobalamina e metilcobalamina. Attraverso questo ruolo, ABCD4 sostiene il metabolismo a un carbonio e le vie mitocondriali che dipendono dall’attività della metionina sintasi e della metilmalonil-CoA mutasi, influenzando così l’equilibrio della metilazione e il metabolismo energetico. L’alterazione della funzione di ABCD4 è associata a errori congeniti del metabolismo della cobalamina, con firme biochimiche che includono una ridotta remetilazione e/o un’alterata catabolizzazione del propionato. ABCD4 viene pertanto studiato nel contesto del traffico lisosomiale, dell’omeostasi dei cofattori e delle risposte allo stress metabolico.
ABCD4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ABCD4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ABCD4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ABCD4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ABCD4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.