ABCD2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405099-ACT

ABCD2 codifica um transportador peroxissomal da família ABC (ATP-binding cassette) que importa ácidos graxos de cadeia muito longa e acil-CoAs relacionados para dentro dos peroxissomos para β-oxidação, contribuindo para a homeostase lipídica celular e o equilíbrio redox. Em células humanas, o ABCD2 atua em conjunto com outros transportadores peroxissomais para regular o catabolismo de ácidos graxos, o remodelamento de lipídios de membrana e a adaptação metabólica sob estresse oxidativo ou inflamatório. Alterações no processamento lipídico peroxissomal e a desregulação do metabolismo de ácidos graxos de cadeia muito longa estão implicadas em mecanismos associados a neurodegeneração e leucodistrofias, tornando o ABCD2 um gene útil para estudar vias compensatórias na biologia dos peroxissomos. A expressão e a atividade de ABCD2 também são relevantes para a comunicação mitocôndria–peroxissomo, incluindo efeitos a jusante sobre o metabolismo energético e a sinalização lipídica.

ABCD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ABCD2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ABCD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ABCD2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ABCD2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ABCD2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ABCD2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ABCD2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ABCD2 em células tumorais com expressão de ABCD2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.