ABC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401086-ACT

O ABCA1 humano (ABC1) codifica um transportador da família ABC (ATP-binding cassette) que exporta colesterol e fosfolipídios para apolipoproteínas pobres em lipídios, iniciando a formação de HDL nascente e sustentando o transporte reverso de colesterol. A atividade do ABC1 é integrada à homeostase lipídica regulada por LXR/RXR e influencia a composição de membrana, a organização de lipid rafts e a sinalização inflamatória em macrófagos e outros tipos celulares. A desregulação da expressão ou da função de ABCA1 perturba o equilíbrio de colesterol celular e tem sido associada a fenótipos relacionados à aterosclerose, a processos neurodegenerativos e a respostas alteradas de células imunes. Como um nó central nas vias de efluxo de colesterol, ABCA1 é amplamente estudado na biologia de lipoproteínas, em pesquisa cardiometabólica e em mecanismos que conectam o metabolismo lipídico à inflamação.

ABC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ABCA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ABC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ABCA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ABCA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ABC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ABCA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ABC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ABC1 em células tumorais com expressão de ABCA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.