52 kDa Ro/SSA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400885-ACT

TRIM21 codifica a proteína Ro/SSA de 52 kDa, uma ligase de ubiquitina E3 que atua como um recetor Fc citosólico para acoplar alvos ligados a anticorpos à degradação proteassomal dependente de ubiquitina. Modula a sinalização imunitária inata e programas de genes inflamatórios ao regular intermediários-chave em vias como o interferão tipo I e o NF-κB, moldando assim as respostas antivirais e ao stress. O TRIM21 também participa no controlo de qualidade proteica e na renovação de complexos de sinalização, ligando a ubiquitinação a resultados transcricionais. A desregulação do reconhecimento imunitário associado a Ro/SSA e da sinalização controlada por TRIM21 tem sido implicada em fenótipos autoimunes associados a autoanticorpos, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de tolerância imunitária e inflamação.

52 kDa Ro/SSA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRIM21 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

52 kDa Ro/SSA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRIM21 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRIM21, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de 52 kDa Ro/SSA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRIM21 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de 52 kDa Ro/SSA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via 52 kDa Ro/SSA em células tumorais com expressão de TRIM21 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.