5-LO CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419091

概要

Alox5は、アラキドン酸からのロイコトリエン生合成における最初の不可逆的段階を触媒する、非ヘム鉄型ジオキシゲナーゼである5-リポキシゲナーゼ（5-LO）をコードします。5-LOの活性はFLAPおよび下流の合成酵素群と協調して、白血球の走化性、血管透過性、気管支トーンを調節するLTB4およびシステイニルロイコトリエンの産生を促進します。この経路は自然免疫シグナル伝達や炎症性脂質メディエーターのネットワークと交差し、マクロファージおよび好中球の機能、ならびにエイコサノイドのバランスに影響を与えます。Alox5/5-LOシグナルの制御不全は、マウスモデルにおいて炎症性の気道・アレルギー表現型、動脈硬化性炎症、腫瘍微小環境のリモデリングと関連づけられています。

5-LO CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAlox5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Alox5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Alox5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、5-LOタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、5-LOシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Alox5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• 5-LOの機能に不可欠なAlox5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Alox5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• 5-LO CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）および5-LO CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Alox5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  5-LO HDRプラスミド（m）および 5-LO HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAlox5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAlox5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。