4E-BP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420150

Panoramica

Eif4ebp2 codifica 4E-BP2, un repressore della traduzione sensibile alla fosforilazione che si lega a eIF4E e modula l’assemblaggio del complesso di inizio della traduzione eIF4F dipendente dal cappuccio. In quanto effettore a valle dell’asse di segnalazione PI3K–AKT–mTOR, 4E-BP2 integra segnali legati a nutrienti, fattori di crescita e stress per regolare finemente la traduzione globale e quella selettiva di specifici mRNA. Nei tessuti murini, 4E-BP2 contribuisce alla proteostasi e a programmi di sintesi proteica dipendenti dall’attività, collegando il controllo della traduzione alla crescita cellulare, all’adattamento metabolico e alla differenziazione. La disregolazione della segnalazione mTOR–4E-BP e un’anomala traduzione cap-dipendente sono spesso associate a fenotipi proliferativi e neurobiologici, rendendo Eif4ebp2 un nodo utile per studi meccanicistici sul controllo della traduzione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO 4E-BP2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Eif4ebp2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Eif4ebp2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Eif4ebp2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina 4E-BP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Eif4ebp2 per lo studio della segnalazione di 4E-BP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Eif4ebp2 critici per la funzione di 4E-BP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Eif4ebp2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal 4E-BP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal 4E-BP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Eif4ebp2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal 4E-BP2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR 4E-BP2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Eif4ebp2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Eif4ebp2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.