4E-BP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420150

概要

Eif4ebp2 は、リン酸化に感受性をもつ翻訳抑制因子 4E-BP2 をコードしており、eIF4E に結合して eIF4F（キャップ依存的翻訳開始複合体）の形成を調節します。PI3K–AKT–mTOR シグナル伝達軸の下流エフェクターとして、4E-BP2 は栄養、増殖因子、ストレスといった入力シグナルを統合し、全体的な翻訳および特定 mRNA を選択的に翻訳する過程を微調整します。マウス組織では、4E-BP2 はプロテオスタシスや活動依存的なタンパク質合成プログラムに寄与し、翻訳制御を細胞増殖、代謝適応、分化と結び付けています。mTOR–4E-BP シグナルの破綻やキャップ依存的翻訳の異常は、増殖性ならびに神経生物学的表現型としばしば関連するため、Eif4ebp2 は翻訳制御の機構研究に有用な結節点となります。

4E-BP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEif4ebp2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Eif4ebp2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Eif4ebp2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、4E-BP2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、4E-BP2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Eif4ebp2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• 4E-BP2の機能に不可欠なEif4ebp2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Eif4ebp2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• 4E-BP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）および4E-BP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Eif4ebp2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  4E-BP2 HDRプラスミド（m）および 4E-BP2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEif4ebp2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEif4ebp2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。