4E-BP1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-420149-LAC

Il gene murino **Eif4ebp1** codifica **4E-BP1**, un repressore della traduzione cap-dipendente sensibile alla fosforilazione, che si lega a **eIF4E** e limita l’assemblaggio del complesso di inizio **eIF4F**. In quanto effettore canonico a valle della via **PI3K–AKT–mTOR**, 4E-BP1 integra segnali di nutrienti, fattori di crescita e stress per modulare la sintesi proteica, la crescita cellulare e i programmi metabolici. La fosforilazione mediata da **mTORC1** libera eIF4E e promuove la traduzione di mRNA coinvolti nella proliferazione e nella sopravvivenza, collegando 4E-BP1 alla regolazione della progressione del ciclo cellulare e delle risposte adattative allo stress. La fosforilazione deregolata di 4E-BP1 e la disponibilità di eIF4E sono ampiamente utilizzate come biomarcatori di un’alterata segnalazione di mTOR in contesti quali la trasformazione oncogenica, difetti della segnalazione insulinica e stati infiammatori, a supporto di studi meccanicistici in modelli rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale 4E-BP1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Eif4ebp1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale 4E-BP1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Eif4ebp1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di 4E-BP1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Eif4ebp1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.