4.1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420186

概要

Epb41l3 は、膜結合性の細胞骨格アダプターであるタンパク質4.1Bをコードしており、膜貫通タンパク質を細胞皮質のアクチン–スペクトリンネットワークに連結し、細胞形態、極性、接着の組織化を助けます。マウス組織では、4.1Bは膜の安定性や細胞間結合部位の構築に寄与し、神経突起の伸長、細胞移動、接触依存的シグナル伝達などの過程に影響を与えます。4.1Bは足場（スキャフォールド）機能を通じて受容体や接着分子の局在・分布を調節し、細胞骨格再編成経路やメカノトランスダクションに影響を及ぼし得ます。実験モデルでは、EPB41L3/4.1Bの制御異常が組織構築の破綻と関連し、腫瘍抑制、浸潤、神経系の恒常性に関わる表現型に結び付くことが示されています。

4.1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEpb41l3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Epb41l3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Epb41l3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、4.1Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、4.1Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Epb41l3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• 4.1Bの機能に不可欠なEpb41l3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Epb41l3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• 4.1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）および4.1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Epb41l3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  4.1B HDRプラスミド（m）および 4.1B HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEpb41l3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEpb41l3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。