γ-sarcoglycan Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402275-ACT

SGCG codifica a γ-sarcoglicana, um componente central do complexo de sarcoglicanas dentro do complexo de glicoproteínas associadas à distrofina, que estabiliza a membrana da célula muscular durante a contração. A γ-sarcoglicana contribui para o acoplamento entre o citoesqueleto e a matriz extracelular, sustentando a integridade do sarcolema e a mecanotransdução no músculo estriado. A disrupção de SGCG prejudica a montagem do complexo de sarcoglicanas e compromete a estabilidade da membrana, promovendo sinalização associada a dano, alteração do manejo de cálcio e remodelamento responsivo ao estresse. A disfunção de SGCG está geneticamente ligada a fenótipos de distrofia muscular, tornando-o um alvo relevante para estudar a biologia do complexo distrofina–glicoproteínas e vias de degeneração muscular.

γ-sarcoglycan O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SGCG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

γ-sarcoglycan O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SGCG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SGCG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de γ-sarcoglycan. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SGCG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de γ-sarcoglycan no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via γ-sarcoglycan em células tumorais com expressão de SGCG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.