γPAK CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401595-ACT

PAK2は、ヒトのセリン／スレオニンキナーゼであるγPAKをコードしており、Rac1/Cdc42に応答するエフェクターとして、アクチン細胞骨格の再構築、焦点接着のターンオーバー、および方向性のある細胞運動を協調的に制御します。γPAKはRhoファミリーGTPアーゼからのシグナルを統合し、MAPKに関連する転写プログラム、細胞周期の進行、ならびにアポトーシスと生存に影響するストレス応答経路を制御します。さらに、細胞骨格ダイナミクスやシグナル伝達の足場（スキャフォールド）に関わる下流基質をリン酸化することで、接着依存的な遊走や膜輸送（メンブレントラフィッキング）などの過程の形成に寄与します。PAK2の活性または発現の異常は、がん生物学における増殖性・浸潤性表現型の変化と関連づけられているほか、炎症や神経発生の文脈に関係するシグナル伝達ネットワーク全体の攪乱とも関連して報告されています。

γPAK CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PAK2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

γPAK CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PAK2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPAK2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性γPAKの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPAK2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるγPAK依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPAK2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるγPAK経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。