γ-catenin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401640-ACT

JUPはγ-カテニン（プラコグロビン）をコードしており、デスモソームおよび接着帯（アドヘレンスジャンクション）の中核構成要素として機能するアルマジロリピートタンパク質です。カドヘリン複合体を中間径フィラメントやアクチン関連ネットワークにつなぎ、上皮組織および心筋組織の恒常性と構造的完全性を支えます。γ-カテニンは、デスモグレイン、デスモコリン、プラコフィリン、デスモプラキンなどとの相互作用を通じて、接着構造の組み立て、メカノトランスダクション（機械刺激のシグナル変換）、ならびに細胞接触依存的な細胞移動と分化の制御を協調的に担います。また、転写プログラムや接着部位から核へのシグナル伝達動態を調節することで、Wnt/β-カテニンシグナル伝達とのクロストークにも関与します。JUPの発現や接着部位への局在が破綻すると、接着性の変化、浸潤性挙動、心筋細胞の構造異常と関連し、バリア機能、組織リモデリング、疾患関連シグナル伝達の研究において重要な標的となります。

γ-catenin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性JUPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

γ-catenin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における JUP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はJUP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性γ-cateninの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のJUP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるγ-catenin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびJUP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるγ-catenin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。