γC-crystallinCRISPR激活质粒(h): sc-402940-ACT

CRYGC 编码人 γC-晶状体蛋白（γC-crystallin），这是一种在眼晶状体中高度丰度的结构蛋白。它通过形成稳定、紧密堆积的蛋白质组装体，维持晶状体的折射率并支持长期透明性。作为 β/γ-晶状体蛋白超家族成员，γC-晶状体蛋白在蛋白质更新极少的条件下，帮助维持晶状体纤维细胞的结构与蛋白质稳态（proteostasis）。晶状体蛋白稳态被破坏会促进蛋白错误折叠与聚集，从而将 CRYGC 失调与晶状体混浊表型联系起来。因此，CRYGC 常被用作研究晶状体发育、应激反应以及与白内障生物学相关的蛋白聚集过程的标志物和机制切入点。

γC-crystallin CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CRYGC的表达。

γC-crystallin CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CRYGC基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CRYGC转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性γC-crystallin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CRYGC位点，并能够研究内源性位点上依赖于γC-crystallin的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CRYGC表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟γC-crystallin通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。