γB-crystallin Plasmide Double Nickase (h): sc-402939-NIC

CRYGB codifica la γB-cristallina umana, una proteina strutturale del cristallino oculare altamente abbondante e a lunga vita, che contribuisce all’indice di rifrazione e alla trasparenza del tessuto grazie a una stabile architettura a domini β/γ-cristallina. La γB-cristallina partecipa alla proteostasi delle cellule delle fibre del cristallino e all’organizzazione spaziale degli assemblaggi di cristalline, in cui variazioni di solubilità, tendenza all’aggregazione o modifiche post-traduzionali possono alterare la diffusione della luce. L’alterazione dell’omeostasi delle cristalline è strettamente collegata alla biologia della cataratta, rendendo CRYGB un punto di ingresso utile per studiare stabilità proteica, comportamento di fase e risposte allo stress in modelli cellulari rilevanti per il cristallino. L’analisi sperimentale di CRYGB supporta indagini sui meccanismi di aggregazione proteica e sul mantenimento delle proprietà ottiche in condizioni di invecchiamento e stress ossidativo.

γB-crystallin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CRYGB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CRYGB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CRYGB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CRYGB interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.