β-tectorin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423332

Descripción general

Tectb codifica la β-tectorina, una glucoproteína secretada que contribuye a la arquitectura de la matriz extracelular de la membrana tectoria del oído interno, donde ayuda a organizar ensamblajes supramoleculares importantes para la mecánica coclear. Al moldear el acoplamiento biomecánico entre la membrana tectoria y los estereocilios de las células ciliadas, la β-tectorina favorece una transducción mecanoeléctrica eficiente y la señalización evocada por el sonido. La alteración de los componentes de la matriz de la membrana tectoria, incluidas las redes asociadas a la β-tectorina, se ha vinculado con cambios en los umbrales auditivos y con fenotipos de hipoacusia neurosensorial, lo que convierte a Tectb en un locus útil para estudiar la regulación de la función sensorial dependiente de la matriz. En modelos murinos, la perturbación de Tectb permite analizar el ensamblaje de la matriz extracelular, la secreción epitelial y las relaciones estructura–función que subyacen al procesamiento auditivo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO β-tectorin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tectb en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tectb junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tectb tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína β-tectorin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tectb para la investigación de la señalización de β-tectorin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tectb críticos para la función de β-tectorin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tectb para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido β-tectorin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido β-tectorin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tectb. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR β-tectorin (m) y el plásmido HDR β-tectorin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tectb para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tectb definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.