β-Arrestin-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416686-ACT

ARRB2 codifica per la β-arrestina-2, un adattatore multifunzionale che regola la desensibilizzazione, l’internalizzazione e il traffico dei recettori accoppiati a proteine G (GPCR) in seguito alla fosforilazione del recettore da parte delle GRK. Oltre a terminare la segnalazione mediata dalle proteine G, la β-arrestina-2 funge da piattaforma per complessi di segnalazione che modulano le vie MAPK/ERK, PI3K–AKT e NF-κB, determinando la durata del segnale e la sua localizzazione subcellulare. Attraverso queste interazioni, ARRB2 influenza la migrazione cellulare, la segnalazione infiammatoria e la segnalazione “biased” dei recettori in diversi sistemi GPCR. Una segnalazione dipendente dalle β-arrestine deregolata è stata collegata in letteratura a reti di segnalazione associate al cancro, alla regolazione cardiometabolica e a processi neuroimmuni, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico in studi focalizzati sulle vie di segnalazione.

β-Arrestin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ARRB2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

β-Arrestin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ARRB2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ARRB2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di β-Arrestin-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ARRB2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da β-Arrestin-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via β-Arrestin-2 nelle cellule tumorali con espressione di ARRB2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.