β-Arrestin-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416686-ACT

ARRB2はβ-アレスチン2をコードしており、これは多機能なアダプター分子として、GRKによる受容体リン酸化後のGタンパク質共役受容体（GPCR）の脱感作、内在化、輸送（トラフィッキング）を制御します。β-アレスチン2はGタンパク質シグナルを終結させるだけでなく、MAPK/ERK、PI3K–AKT、NF-κB経路を調節するシグナル伝達複合体の足場（スキャフォールド）としても機能し、シグナルの持続時間や細胞内局在を規定します。これらの相互作用を通じて、ARRB2は多様なGPCR系における細胞移動、炎症性シグナル、ならびに受容体バイアス型シグナル伝達に影響します。β-アレスチン依存的シグナルの異常は、文献上、がん関連シグナルネットワーク、心代謝調節、神経免疫プロセスと関連付けられており、経路に焦点を当てた研究における機構的ハブとしての有用性が示唆されています。

β-Arrestin-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARRB2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

β-Arrestin-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ARRB2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はARRB2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性β-Arrestin-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のARRB2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるβ-Arrestin-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびARRB2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるβ-Arrestin-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。