β6 Tubulin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400062

Panoramica

TUBB6 codifica la β6-tubulina umana, un’isotipo di β-tubulina che forma eterodimeri con l’α-tubulina per generare i microtubuli, sostenendo l’architettura del citoscheletro e il trasporto intracellulare. La dinamica dei microtubuli, regolata dalla composizione in isotipi di tubulina, controlla l’assemblaggio del fuso mitotico, la segregazione dei cromosomi e la progressione del ciclo cellulare, e contribuisce anche a definire la polarità e la motilità cellulare. La β6-tubulina partecipa a vie che controllano il traffico vescicolare e il posizionamento degli organelli attraverso interazioni con proteine associate ai microtubuli e complessi motori. La disregolazione delle reti di tubulina e del comportamento dei microtubuli è associata a fenotipi proliferativi, instabilità cromosomica e programmi di migrazione alterati, rilevanti per la biologia del cancro e per altri disturbi legati al citoscheletro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO β6 Tubulin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TUBB6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TUBB6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TUBB6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina β6 Tubulin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TUBB6 per lo studio della segnalazione di β6 Tubulin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TUBB6 critici per la funzione di β6 Tubulin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TUBB6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal β6 Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal β6 Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TUBB6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal β6 Tubulin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR β6 Tubulin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TUBB6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TUBB6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.