β2C Tubulin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400056-ACT

TUBB4B codifica la tubulina β2C, un’isotipo “core” di β-tubulina che polimerizza con le α-tubuline per formare i microtubuli, sostenendo l’architettura del citoscheletro, il trasporto intracellulare e l’assemblaggio del fuso mitotico. La dinamica dei microtubuli, guidata dagli eterodimeri di tubulina, regola la progressione del ciclo cellulare, il traffico vescicolare e l’organizzazione dei prolungamenti neuronali attraverso vie che coinvolgono proteine motrici come chinesine e dineine. L’alterazione dell’espressione degli isotipi di tubulina e il rimodellamento dei microtubuli sono spesso studiati in contesti di instabilità cromosomica, compromissione della polarità cellulare e risposte allo stress che accompagnano la trasformazione oncogenica. Poiché i microtubuli sono centrali per divisione e migrazione, TUBB4B è ampiamente rilevante per ricerche sulla regolazione del citoscheletro, sulla differenziazione e sui fenotipi guidati dal microambiente.

β2C Tubulin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TUBB4B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

β2C Tubulin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TUBB4B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TUBB4B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di β2C Tubulin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TUBB4B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da β2C Tubulin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via β2C Tubulin nelle cellule tumorali con espressione di TUBB4B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.