β-1,4-GalNAc-T3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-415306-ACT

B4GALNT3 codifica la β-1,4-GalNAc-T3 umana, una glicosiltransferasi localizzata nel Golgi che trasferisce N-acetilgalattosamina con legame β1,4 per generare specifici epitopi glicani terminali su glicoproteine e glicolipidi. Modellando i pattern di glicosilazione sulla superficie cellulare e nelle proteine secrete, la β-1,4-GalNAc-T3 influenza il traffico proteico, le interazioni recettore–ligando e la segnalazione mediata dalle lectine, con effetti su adesione e comunicazione cellulare. Un’espressione o un’attività alterata di B4GALNT3 è stata associata al rimodellamento disfunzionale dei glicani osservato nella biologia dei tumori e in altre condizioni in cui una glicosilazione aberrante modula proliferazione, invasione e riconoscimento immunitario. Questo gene è quindi rilevante per studi su vie dipendenti dalla glicosilazione, composizione del glicocalice e meccanismi che collegano i programmi enzimatici del Golgi ai fenotipi di malattia.

β-1,4-GalNAc-T3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di B4GALNT3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

β-1,4-GalNAc-T3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus B4GALNT3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione B4GALNT3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di β-1,4-GalNAc-T3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus B4GALNT3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da β-1,4-GalNAc-T3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via β-1,4-GalNAc-T3 nelle cellule tumorali con espressione di B4GALNT3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.