β-1,4-Gal-T1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403299-ACT

B4GALT1 codifica a β-1,4-Gal-T1 humana, uma β1,4-galactosiltransferase residente no complexo de Golgi que transfere galactose para N-acetilglicosamina, gerando motivos de N-acetillactosamina em glicanos N- e O-ligados e em glicoesfingolípidos. Esta atividade é central para a ramificação e a maturação dos glicanos na via secretória, influenciando a dobragem proteica, o tráfego intracelular e a apresentação de glicanos na superfície celular. Ao moldar interações dependentes de glicosilação, a β-1,4-Gal-T1 afeta a adesão celular, a sinalização de recetores e processos de reconhecimento imunitário. A glicosilação ligada a B4GALT1, quando desregulada, tem sido associada a alterações na função de glicoproteínas e a fenótipos relevantes para doença em contextos de investigação sobre inflamação, biologia do cancro e perturbações congénitas da glicosilação.

β-1,4-Gal-T1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de B4GALT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

β-1,4-Gal-T1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus B4GALT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição B4GALT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de β-1,4-Gal-T1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus B4GALT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de β-1,4-Gal-T1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via β-1,4-Gal-T1 em células tumorais com expressão de B4GALT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.