Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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α2B-AR Double Nickaseプラスミド (h): sc-403430-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- α2B-AR Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- α2B-ARダブルニカースプラスミド（h）およびα2B-ARダブルニカースプラスミド（h2）は、ADRA2Bを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: α2B-AR 抗体 (G-9): sc-390430
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
α2B-AR Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403430-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α2B-AR Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403430-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADRA2B はヒトの α2B アドレナリン受容体（α2B-AR）をコードしており、カテコールアミンに応答してアデニリルシクラーゼ活性、細胞内 cAMP、ならびに下流の PKA 依存性シグナル伝達を調節する Gi/o 共役型 GPCR である。受容体の活性化は、G タンパク質および β-アレスチン機構を介して MAPK/ERK 経路や PI3K 関連経路も動員し、神経伝達物質放出、平滑筋の収縮性、血管トーヌスといった細胞応答を形成する。免疫および代謝の文脈では、α2B-AR シグナルはストレス応答性の転写プログラムに影響し、他の神経調節受容体とのクロストークにも関与する。ADRA2B の遺伝的変異や発現変動は、神経行動学的表現型や心血管調節との関連で検討されており、アドレナリン作動性シグナル伝達ネットワークの機構研究における重要性が示されている。
α2B-AR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADRA2B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADRA2B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADRA2Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADRA2Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。