α_1A-AR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401726

Panoramica

ADRA1A codifica il recettore α1A-adrenergico umano (α1A-AR), un recettore accoppiato a proteina G che si associa preferenzialmente a Gq/11 per attivare la fosfolipasi C, aumentare il Ca2+ intracellulare e stimolare la segnalazione dipendente da PKC. Il recettore α1A-AR regola la contrazione della muscolatura liscia, il tono vascolare e la neurotrasmissione, e può attivare a valle le vie MAPK/ERK che influenzano la proliferazione cellulare e i programmi trascrizionali. L’attività del recettore contribuisce al controllo adrenergico della fisiologia cardiovascolare e genitourinaria e modula reti di segnalazione sensibili allo stress in molteplici tessuti. La disregolazione della segnalazione adrenergica e le alterazioni dell’espressione di ADRA1A sono state studiate in contesti quali l’ipertensione, la funzione del tratto urinario inferiore e la segnalazione nel microambiente tumorale, offrendo un punto di accesso meccanicistico per ricerche focalizzate sulle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α1A-AR (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ADRA1A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ADRA1A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ADRA1A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α1A-AR.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ADRA1A per lo studio della segnalazione di α1A-AR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ADRA1A critici per la funzione di α1A-AR
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ADRA1A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α1A-AR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal α1A-AR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ADRA1A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α1A-AR Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR α1A-AR (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ADRA1A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ADRA1A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.