α-defensin 4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407288-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- α-defensin 4 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- α-defensin 4ダブルニカースプラスミド（h）およびα-defensin 4ダブルニカースプラスミド（h2）は、DEFA4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
α-defensin 4 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-407288-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α-defensin 4 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-407288-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DEFA4はヒトα-ディフェンシン4をコードしており、好中球顆粒に豊富に含まれるカチオン性抗菌ペプチドとして、粘膜および上皮の境界面における自然免疫防御に寄与します。脱顆粒やNET（好中球細胞外トラップ）関連応答の際に放出されると、α-ディフェンシン4は微生物膜を直接破壊するとともに、病原体関連分子パターン（PAMP）や宿主細胞受容体との相互作用を介して局所の炎症シグナルを調節し得ます。その作用は、好中球のエフェクタープログラム、走化性、ならびに初期の宿主—病原体相互作用を形作るサイトカインネットワークと交差します。ディフェンシン発現の変化や好中球機能異常は、炎症性疾患や感染に関連する免疫表現型の文脈で研究されており、DEFA4は自然免疫研究におけるマーカーおよび機序上の結節点として位置づけられています。
α-defensin 4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DEFA4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DEFA4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DEFA4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DEFA4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。