α-actinin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400379-ACT

ACTN1 codifica a α-actinina-1 humana, uma proteína de ligação cruzada de filamentos de actina que se localiza em fibras de estresse e adesões focais, organizando o citoesqueleto cortical e sustentando a forma, a adesão e a migração celular. Ao acoplar a F-actina a complexos de adesão, a α-actinina-1 contribui para a mecanotransdução e para a remodelação dinâmica da rede de actina durante processos como o espalhamento e a motilidade. A função de ACTN1 cruza-se com vias de sinalização dependentes de integrinas e com a regulação do citoesqueleto que influenciam a biologia de plaquetas e megacariócitos. A disrupção genética ou a desregulação de ACTN1 tem sido associada a macrotrombocitopenia hereditária e a alterações na produção de plaquetas, tornando-o relevante para estudos do controle do citoesqueleto na hematopoiese e na biomecânica celular.

α-actinin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACTN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

α-actinin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACTN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACTN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de α-actinin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACTN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de α-actinin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via α-actinin-1 em células tumorais com expressão de ACTN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.