αA-crystallin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419820

Panoramica

Cryaa codifica l’αA-cristallina, una piccola proteina da shock termico altamente abbondante nel cristallino oculare, che agisce come chaperone molecolare indipendente dall’ATP per mantenere la solubilità delle cristalline e prevenire l’aggregazione proteica in condizioni di stress. Oltre al suo ruolo strutturale nello stabilire la trasparenza del cristallino e le sue proprietà refrattive, l’αA-cristallina contribuisce alla proteostasi interagendo con proteine client mal ripiegate e modulando reti di risposta allo stress legate all’equilibrio redox e all’apoptosi. Un’espressione o una funzione alterata di CRYAA è associata a disfunzione delle cellule delle fibre del cristallino, a un’omeostasi proteica compromessa e a fenotipi correlati alla cataratta, rendendola un nodo chiave per lo studio dello sviluppo del cristallino e dei processi di aggregazione proteica legati all’invecchiamento. Nei modelli murini, la perturbazione di Cryaa supporta studi meccanicistici sull’attività chaperonica, sull’organizzazione del citoscheletro e sulla resilienza allo stress nelle cellule epiteliali e nelle cellule delle fibre del cristallino.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO αA-crystallin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cryaa in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cryaa insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cryaa a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina αA-crystallin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cryaa per lo studio della segnalazione di αA-crystallin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cryaa critici per la funzione di αA-crystallin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cryaa per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal αA-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal αA-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cryaa. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal αA-crystallin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR αA-crystallin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cryaa per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cryaa definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.