αA-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419820

概要

Cryaaは、眼の水晶体に高発現する低分子熱ショックタンパク質であるαA-クリスタリンをコードしており、ATP非依存性の分子シャペロンとしてクリスタリンの可溶性を維持し、ストレス下でのタンパク質凝集を防ぎます。水晶体の透明性や屈折特性を成立させる構造的役割にとどまらず、αA-クリスタリンはミスフォールドしたクライアントタンパク質と相互作用し、酸化還元バランスやアポトーシスに関わるストレス応答ネットワークを調節することで、プロテオスタシスにも寄与します。CRYAAの発現や機能の変化は、水晶体線維細胞の機能不全、タンパク質恒常性の破綻、白内障関連表現型と関連しており、水晶体発生や加齢に伴うタンパク質凝集過程を研究するうえで重要な結節点となります。マウス系では、Cryaaの攪乱により、水晶体上皮細胞および線維細胞におけるシャペロン活性、細胞骨格の組織化、ストレス耐性の機構解析が可能になります。

αA-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCryaa遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cryaa内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cryaaのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、αA-crystallinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、αA-crystallinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cryaa欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• αA-crystallinの機能に不可欠なCryaaエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cryaaゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• αA-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびαA-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cryaa遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  αA-crystallin HDRプラスミド（m）および αA-crystallin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCryaaホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCryaa標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。