Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
α1a Tubulin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400022
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- α1a Tubulin Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico α1a Tubulin, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: α1a Tubulin Antibody (7-RY28): sc-134237
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
α1a Tubulin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400022 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
TUBA1A codifica l’α1a-tubulina, un’isotipo principale di α-tubulina che forma un eterodimero con la β-tubulina per assemblare i microtubuli, sostenendo l’architettura del citoscheletro, il trasporto intracellulare e la funzione del fuso mitotico. La dinamica dei microtubuli, governata dalla composizione α/β-tubulina e dalle proteine associate, coordina processi quali la migrazione neuronale, la guida assonale e il traffico vescicolare. TUBA1A è arricchito nel sistema nervoso in via di sviluppo e alterazioni nella polimerizzazione o nella stabilità dei microtubuli possono perturbare i programmi di sviluppo corticale. Varianti patogene di TUBA1A sono associate alle tubulinopatie e a disturbi del neurosviluppo caratterizzati da malformazioni dello sviluppo corticale e da una connettività neuronale compromessa.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α1a Tubulin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TUBA1A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TUBA1A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TUBA1A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α1a Tubulin.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TUBA1A per lo studio della segnalazione di α1a Tubulin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni TUBA1A critici per la funzione di α1a Tubulin
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TUBA1A per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal α1a Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal α1a Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TUBA1A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal α1a Tubulin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR α1a Tubulin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TUBA1A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TUBA1A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.