α1a Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400022

概要

TUBA1Aはα1aチューブリンをコードしており、βチューブリンとヘテロ二量体を形成して微小管を組み立てる、主要なαチューブリンアイソタイプの一つです。微小管は細胞骨格構造、細胞内輸送、そして有糸分裂紡錘体の機能を支えます。α/βチューブリンの組成および関連タンパク質によって制御される微小管ダイナミクスは、神経細胞の移動、軸索ガイダンス、小胞輸送といった過程を協調的に調節します。TUBA1Aは発生期の神経系で高発現しており、微小管の重合や安定性の破綻は大脳皮質の発生プログラムを攪乱し得ます。TUBA1Aの病的変異はチューブリン病（tubulinopathy）や神経発達障害と関連し、皮質形成異常や神経回路連結の障害を特徴とします。

α1a Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTUBA1A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TUBA1A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TUBA1Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、α1a Tubulinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、α1a Tubulinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TUBA1A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• α1a Tubulinの機能に不可欠なTUBA1Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TUBA1Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• α1a Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびα1a Tubulin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TUBA1A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  α1a Tubulin HDRプラスミド（h）および α1a Tubulin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTUBA1Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTUBA1A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。