ZFP57 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404270-ACT

ヒトZFP57は、インプリンティング制御領域においてメチル化DNAに結合し、KAP1/TRIM28および関連するクロマチン修飾因子をリクルートして、初期発生期にDNAメチル化と抑制的ヒストン修飾を維持するKRAB型ジンクフィンガータンパク質をコードしている。このエピジェネティックな維持機能を通じて、ZFP57はゲノムインプリンティング、アリル特異的な遺伝子制御、ならびに特定座位における安定した転写サイレンシングを支える。ZFP57に関連するインプリンティング・プログラムの破綻は、異常なメチル化パターンや発生制御の乱れと関連し、インプリンティング異常症やエピゲノム安定性の研究において重要である。そのためZFP57は、DNAメチル化維持、KRAB依存的抑制、およびクロマチンリモデリング経路を解析するためのモデル因子として広く用いられている。

ZFP57 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ZFP57の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ZFP57 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ZFP57 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZFP57転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ZFP57の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZFP57遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZFP57依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZFP57発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZFP57経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。