ZC3H4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-436020-ACT

O gene Zc3h4 de camundongo codifica a ZC3H4, uma proteína ligadora de RNA do tipo dedo de zinco CCCH implicada no metabolismo de RNA nuclear e no controle transcricional. Evidências emergentes associam a ZC3H4 à regulação da transcrição próxima ao promotor e ao processamento de RNA em elementos regulatórios, influenciando programas de expressão gênica que moldam transições de estado celular. Por meio da coordenação entre vigilância de RNA e processos transcricionais associados à cromatina, a ZC3H4 é relevante para vias que governam a diferenciação, a expressão gênica responsiva ao estresse e a regulação do genoma. A desregulação desses mecanismos está amplamente associada a fenótipos relacionados a doenças, incluindo alterações no controle proliferativo e instabilidade transcricional em contextos de câncer e de neurodesenvolvimento.

ZC3H4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Zc3h4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZC3H4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Zc3h4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Zc3h4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZC3H4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Zc3h4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZC3H4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZC3H4 em células tumorais com expressão de Zc3h4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.